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微生物合成磷脂酰絲氨酸的代謝通路優化與基因編輯策略

發表時間:2025-11-13

微生物合成磷脂酰絲氨酸(PS)的代謝通路優化與基因編輯策略是提高其產量和質量的重要手段,以下是相關介紹:

微生物合成磷脂酰絲氨酸的代謝通路

真核微生物:在酵母中,磷脂酰絲氨酸通過CDP-二酰甘油與絲氨酸反應生成,這一過程由其合成酶催化。

原核微生物:大腸桿菌等原核生物合成磷脂酰絲氨酸的途徑與酵母類似,也是以CDP-二酰甘油和絲氨酸為底物,在磷脂酰絲氨酸合成酶的作用下合成,此外,還可以通過磷脂酶DPLD)介導的磷脂酰膽堿(PC)與 L-絲氨酸的轉磷脂?;磻铣闪字=z氨酸。

代謝通路優化策略

增加前體物質供應:在谷氨酸棒桿菌中,敲除L-絲氨酸代謝為丙酮酸途徑中的絲氨酸脫氨酶編碼基因sdaA,可使總磷脂中磷脂酰絲氨酸含量提高。同時,過表達3-磷酸甘油酸脫氫酶基因 serAΔ591、磷酸絲氨酸轉氨酶基因serC、磷酸絲氨酸磷酸酶基因serBCDP-甘油二酯合成酶基因cdsA,也能顯著提高磷脂酰絲氨酸含量。

優化關鍵酶基因:通過蛋白質工程改造磷脂酶DPLD),可以提高其轉磷脂?;钚?,降低水解活性。如對來源于鏈霉菌的PLD進行改造,獲得的四突變體SkPLDY405A/Q407G/D370P/K478P,其磷脂酰絲氨酸產量比野生型提高了59.6%。

阻斷競爭代謝途徑:敲除大腸桿菌中的sdaA、sdaBpgpB基因,阻斷L-絲氨酸和磷酸乙醇酸的部分分解代謝途徑,可使磷脂酰絲氨酸在菌體總磷脂中的含量提高一倍多。

基因編輯策略

基因敲除:利用Red同源重組技術等基因編輯手段,敲除微生物中與磷脂酰絲氨酸合成競爭的代謝途徑相關基因,如敲除谷氨酸棒桿菌中的sdaA基因,也可以敲除影響其產量的負調控基因,解除對它合成的抑制。

基因過表達:將磷脂酰絲氨酸合成途徑中的關鍵酶基因進行過表達,如在谷氨酸棒桿菌中過表達serAΔ591serC、serB、cdsA等基因,可增加它的合成,還可以引入外源的磷脂酰絲氨酸合成酶基因,如在谷氨酸棒桿菌中引入大腸桿菌K12的磷脂酰絲氨酸合成酶基因pssA,提高它的產量。

基因整合:通過轉座子插入技術等,將PLD的高表達模塊成功插入地衣芽孢桿菌中,篩選得到的重組菌株傳代穩定,可高效表達PLD

本文來源于理星(天津)生物科技有限公司官網 http://www.bjymrs.com/

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